内容简介

《生物实验室系列:转染实验技术》不仅可作为从事生命科学，特别是分子生物学相关领域工作者的实验室必备参考工具书，同时也可供高校相关专业师生及科学工作者对转染实验技术的理论做深入探讨时参考。

图书目录

第1章转染实验技术概述1 11转染实验技术简介1 111转染实验技术的概念1 112外源基因转染真核细胞的目的、意义1 12转染实验技术的分类及原理2 121病毒感染法2 122非病毒感染法3 13转染实验技术的应用5 14新材料与新技术在转染实验技术中的应用7 参考文献8 第2章目的基因的获取9 21目的基因概述9 22化学合成法获取目的基因11 221磷酸二酯法12 222磷酸三酯法14 223亚磷酸三酯法15 224寡核苷酸连接法15 23基因组文库钓取目的基因17 24cDNA文库钓取目的基因19 241mRNA的分离纯化（过程）20 242双链cDNA的体外合成20 25PCR获取目的基因24 251PCR扩增DNA的基本原理24 252PCR扩增产物的克隆26 253PCR技术在目的基因制备中的应用27 26RTPCR法获取目的基因27 参考文献28 第3章基因表达载体的选择29 31基因表达载体概述29 32基因表达载体分类31 33基因表达载体的遗传标记32 34常用原核基因表达质粒载体34 35常用真核基因表达质粒载体38 36病毒型表达载体42 361噬菌体载体43 362反转录病毒载体49 363腺病毒载体52 37可表达融合蛋白的载体54 371谷光甘肽S转移酶（GST）融合蛋白载体54 372pMALTM融合蛋白表达载体56 38基因表达载体的改造57 381报道基因的改造57 382启动子的研究57 383大容量载体57 参考文献58 第4章重组子的构建与鉴定59 41限制性内切酶59 42黏断连接方法及重点技术60 421单酶切位点的连接60 422双酶切位点的连接61 423同工异源酶及同尾酶酶切位点的连接62 43平端连接方法及重点技术62 44酶切位点的改造和连接63 441黏断切口转化为平端切口的连接63 442人工接头的设计及人工黏断切口的制备63 443酶切位点的化学修饰64 45重组子的筛选与鉴定64 451表型水平筛选65 452分子水平鉴定66 参考文献68 第5章化学转染方法将重组体导入真核细胞69 51磷酸钙共沉淀法69 511磷酸钙共沉淀法原理69 512转染试剂、材料69 513仪器设备70 514操作步骤70 515注意事项及影响因素72 52DEAE葡聚糖法转染73 521DEAE葡聚糖法转染原理73 522转染试剂73 523仪器设备74 524操作步骤74 525操作注意事项74 53脂质体介导的转染75 531脂质体介导的转染原理75 532转染试剂77 533仪器设备77 534操作步骤77 535操作注意事项78 54纳米材料介导的转染78 541纳米材料介导的转染原理79 542转染试剂79 543仪器设备79 544操作步骤79 545操作注意事项81 参考文献81 第6章物理转染方法将重组体导入真核细胞82 61显微注射法转染82 611显微注射法原理83 612转染试剂83 613仪器设备83 614操作步骤84 615操作注意事项85 62电穿孔法转染86 621电穿孔法转染原理86 622转染试剂87 623仪器设备88 624操作步骤89 625操作注意事项89 63基因枪转染90 631基因枪技术的发展历史90 632基因枪介导的转染原理和设备90 633转染试剂：微弹载体、DNA微载体92 634操作步骤93 635操作注意事项94 636基因枪技术作为新兴的转移基因的优点94 637基因枪的发展趋势94 参考文献95 第7章病毒转染方法将重组体导入真核细胞96 71病毒转染系统概述96 72包装细胞概述96 73高浓度病毒原液的收集及滴度测定方法97 731高浓度病毒原液收集97 732病毒滴度测定方法97 74病毒转染的辅助系统98 741转染试剂98 742细胞状态98 743转染方法98 744载体构建100 75腺病毒介导的转染100 751腺病毒介导的转染原理100 752转染试剂101 753仪器设备104 754操作步骤105 755操作注意事项112 76反转录病毒介导的转染112 761反转录病毒介导的转染原理112 762转染试剂115 763仪器设备116 764操作步骤116 765操作注意事项118 参考文献119 第8章转染成功细胞的选择120 81遗传报道基因系统120 811报道基因系统概述120 812报道基因的分类及使用选择122 813报道基因技术的前景展望123 814常见的报道基因124 82报道基因的同位素分析法127 821放射性同位素的基本性质128 822射线的防护128 83报道基因的非同位素分析法129 831酶联免疫法（ELISA）129 832荧光法133 833免疫组织化学染色法133 参考文献135 第9章转染技术的应用137 91转基因动物及基因敲除动物137 911转基因动物的定义137 912制备转基因动物的方法137 913基因敲除动物138 92转基因植物139 921转基因植物的定义139 922常用的植物转基因方法139 923转基因植物的主要应用方向140 93基因制药140 931基因制药概述140 932基因工程药物生产的基本过程141 933基因制药技术的主要应用141 94基因治疗142 941遗传性疾病的基因治疗142 942肿瘤基因治疗143 943其他疾病的基因治疗143 95RNA干扰治疗143 951在骨病治疗中的应用144 952在神经系统疾病中的应用144 953在肿瘤治疗中的应用145 954在抗病毒治疗中的应用145 955在皮肤病治疗中的应用145 参考文献146

序言

出版者的话 21世纪是生命科学的世纪，这已成为人们的共识。 生命科学随着人类对自身和自然的认识、探索而萌芽，随着人类生产和科学实践的进步而发展。现代生命科学包括生物学、医学、农学等传统学科领域，以及生物学、生物技术与环境科学乃至社会科学等其他学科相互渗透、交叉而产生的新型学科体系。20世纪后叶，现代生物科学尤其是分子生物学取得了一系列突破性成就，使得生命科学在自然科学体系中的位置发生了革命性的变化，成为21世纪的带头学科。人们对生命科学也寄予了无限的期望，希望能够解决人类社会所面临的人口膨胀、资源匮乏、疾病危害、环境污染和生态破坏等一系列重大问题。 回顾生命科学的发展历程，实验技术一直起着非常重要的促进作用。如17世纪Leeuwenhoek等人发明并应用显微镜技术，直接催生了“细胞学说”的建立和发展；1973年cohn和Boyer完成了DNA体外重组实验，标志着基因工程的肇始；1988年Kary Mullis发明的PCR技术甚至使生命科学产生了飞跃性的发展。可以说，生命科学每时每刻离不开实验，实验是开启神奇的生命王国大门的钥匙。没有实验技术的不断进步，也就没有生命科学今天的巨大发展；同时，生命科学的发展又对实验技术提出了更高的要求，进一步刺激了后者的不断进步。生命科学正是在“实验催生和验证着基础理论，理论指导和发展了实验技术”的不断循环中从必然王国走向自由王国。 工欲善其事，必先利其器。为了有助于生命科学工作者更多地了解相关实验技术和仪器设备，更好地设计实验方案，更有效地开展实验过程，更合理地处理实验结果，化学工业出版社组织出版了《生物实验室系列》图书。系列图书在整体规划的基础上，本着“经典、前沿、实用，理论与技术并重”的原则组织编写，分批出版。 在题材上，系列图书涵盖综合实验技术和单项实验技术两个方面。其中综合实验技术既有以实验目的为题，如“蛋白质化学分析技术”，内容纵向覆盖多项实验技术；也有以某一生命学科领域的综合实验技术为题，如“发酵工程实验技术”、“生物化学实验技术”等。而单项实验技术则以深入介绍某一专项技术及其应用为主，在阐述其基本原理的基础上，横向介绍该项技术在多个领域的应用，如“双向电泳技术”、“流式细胞术”等。 在内容上，系列图书主要有以下两个显著特点。一是强调先进性——除了系统介绍常用和经典实验技术以外，特别突出了当前该领域实验手段的新理论、新技术、新发展，为国内专业人员起到借鉴和引导作用。二是强调可操作性——对于每一项实验技术，系统介绍其原理方法、设备仪器和实验过程，让读者明了实验的目的、方案设计以及具体步骤和结果处理，以期起到实验指南的作用。 本系列图书坚持质量为先，开拓国内和国际两个出版资源。一方面，邀请国内相关领域兼具理论造诣和丰富实验室工作经验的专家学者编著；另一方面，时刻关注国际生命科学前沿领域和先进技术的进展，及时引进(翻译或影印)国外知名出版社的权威力作。 《生物实验室系列》图书的读者对象设定为国内从事生命科学及生物技术和相关领域(如医学、药学、农学)的专业研究人员，企业或公司的生产、研发、管理技术人员，以及高校相关专业的教师、研究生等。 我们殷切希望《生物实验室系列》图书的出版能够服务于我国生命科学的发展需要，同时热忱欢迎从事和关心生命科学的广大科技人员不仅对已出版图书提供宝贵意见和建议，也能对系列图书的后续题目设计贡献良策或推荐作者，以便我们能够集思广益，将这一系列图书沿着可持续发展的方向不断丰富品种，推陈出新。 谨向所有关心和热爱生命科学，为生命科学的发展孜孜以求的科学工作者致以崇高的敬意! 祝愿我国的科技事业如生命之树根深叶茂，欣欣向荣! 化学工业出版社生物•医药出版分社