电泳简介

聚丙酰胺凝胶电泳

中性聚丙烯酰胺凝胶电泳

安装电泳装置和配制凝胶溶液

操作步骤

1.必要时可用KOH/甲醇清洗玻璃板和间隔片。

2.用温热的去污剂溶液洗涤玻璃板和间隔片，再充分漂洗，先用自来水，再用去离子水。应拿取玻璃的边缘部分或带手套操作，以免手上的油脂残留在玻璃板的工作面上。用乙醇冲洗玻璃板，并将其置于一边晾干。

3.（可做可不做）其中一块玻璃板的一面用硅化液处理（如Sigmacote或Acrylease）：在化学通风厨内，将玻璃板放于一叠纸巾上，倒少量硅化液于其表面上，用Kimwipes纸巾涂抹均匀，然后用去离子水冲洗、纸巾擦干。

4.安装玻璃与间隔片：

a.将较大的（不带凹口）玻璃板平放在实验台上，在玻璃板的两侧将间隔片平行置于其边缘放妥。

b.用凡士林轻涂以助于间隔片在后面的操作中保持原位。

c.将内板（带凹口的玻璃板）在间隔片上放妥。

d.用夹子或铁皮制纸夹将玻璃板加在一起，将整块玻璃的两边及底部用凝胶密封带封紧，形成不透水密封。

5.根据玻璃板的大小和间隔片的厚度计算所需凝胶的体积。

6.（可做可不做）将所需用量的聚丙烯酰胺：亚甲双丙烯酰溶液放于一干净的带侧臂的烧瓶中，加入磁力搅拌子，抽真空脱气。开始脱气应温和一些，并边脱气边旋转烧瓶直至不再有气泡溢出为止。

灌制凝胶

7.下面的操作需要戴手套，在托盘上进行，以免溅出的丙烯酰胺：亚甲双丙烯酰溶液洒在实验台上。动作应迅速，于丙烯酰胺聚合前完成。

a.每100ml丙烯酰胺：亚甲双丙烯酰溶液中加入35μlTEMED，轻轻旋转混匀溶液。

b.用50ml注射器吸取凝胶溶液，调转注射器，排净进入针管的空气。将注射器的针头插入两块玻璃板之间的空隙，注入丙烯酰胺溶液，几乎注满改空隙。