精液稀释粉
精液稀释粉是用于配制适宜猪精子存活、保持其受精力的稀释液。因此,要求配置好的稀释液与精液维持相同的渗透压,能抑制精液内的微生物繁殖,中和精子代谢产生的副产物,提供精子所需要的能量物种。
背景信息
尽管猪人工授精开始于20世纪30年代,但直到20世纪80年代才在养猪业中广泛应用,近年来,猪人工授精的比例还在持续上升。猪人工授精中,有90%以上是用鲜精或保存于15度~20度下的常温保存精液进行输精。与公母猪自然交配相比,利用常温保存的精液进行输精需要对收集的精液进行稀释处理,而公猪精液的特殊性决定了经过稀释后的精子不但要保存本身的受精能力,还要延长自己的存活时间,所以对稀释粉的要求较高。因此,公猪精液稀释粉液应运而生。
精液的配置
1、清洗双手并擦干。
2、打开恒温水浴锅电源,设定温度,一般温度范围为33-39℃。操作时根据上一次原精温度来设定,保证稀释液温度与原精温差不超过10C。
3、根据当天精液生产计划,确定精液稀释液的配制量,从冰箱中取出相应的稀释粉,置于室温中。
4、把一次性稀释袋套入稀释容器中,用电子称准确称取1000ml或2000ml双蒸水或纯水(注意容器去皮),置于恒温水浴锅中预热。
5、待双蒸水或纯水加热到30℃左右时,将稀释粉包装要求倒入相应体积的蒸馏水或纯水中,必要时可用水冲洗精液稀释粉袋内壁。
6、在稀释容器中放入磁力搅拌器,用磁力搅拌器搅拌15分钟(稀释液不必加热),以帮助稀释剂溶解。
7、将配制好的稀释液放入恒温水浴锅中水浴加热,确保使用前稀释液整体加热到与原精温差不超过10C。
8、稀释液应在配制好的1小时(或根据具体产品要求时间)后使用,以保证其中的PH值和渗透压以及其它离子浓度达到稳定。
精液的稀释
1、精液采精后应尽快在15分钟内开始稀释。
2、精液要求等温稀释,稀释液与精液两者温差不超过10C,根据上一次原精温度来设定水浴锅温度,稀释液先预热至设定温度,以精液温度为标准来调节稀释液的温度,绝不能反过来操作。每次稀释前检查原精和稀释液温度是否符合等温稀释要求,稀释液温度高于原精温度1℃,取出稀释液至室温,降温至稀释标准。稀释液温度低于原精温度1℃,调节恒温水浴锅温度,升温至稀释标准。
3、低倍稀释:原精和稀释剂按1:1做第一次稀释,稀释时将稀释液沿盛精液的杯壁缓慢加入到精液中,然后轻轻摇动或用玻璃棒搅拌,混合均匀。
4、精液品质检查:用移液枪取1:1稀释后的精液20μl至预热过的载玻片上,盖上盖玻片,在160倍或400倍显微镜下观察精子活力、畸形率和死精率,
5、按0%-100%评分。未经品质检查或检查不合格(活力70%以下,畸形率和死精率合计>20%)的精液不能稀释。
6、确定最终稀释倍数:按每个输精剂量含40亿个总精子,输精量为80ml确定稀释倍数,例如:某头公猪一次采精量是200ml,活力为0.8,密度为2亿/ml,要求每个输精剂量是含40亿精子,输精量为80ml,则总精子数为200ml×2亿/ml=400亿,输精头份为400亿÷40亿=10份,加入稀释液的量为10×80ml-200ml=600ml。余下稀释液用量=需求稀释液总量-第一次稀释液用量。
7、高倍稀释:确认稀释液和原精温度符合稀释标准,将余下的稀释液沿壁缓慢加入,轻轻旋转摇动,或用玻璃棒轻轻搅拌,混合均匀。