简介

概述

分光光度计

分光光度法是在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性或定量分析。常用的波长范围为：(1)200～380nm的紫外光区，(2)380～780nm的可见光区，(3)2.5～25μm（按波数计为4000cm<-1>～400cm<-1>）的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。

仪器组成

分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。

仪器主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。

光谱范围

包括波长范围为400~760 nm的可见光区和波长范围为200～400 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。

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钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的400～760nm波长的光谱光通过三棱镜折射后,可得到由红橙，黄绿，蓝靛，紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度计的光源。

氢灯（或氘灯）的发射光谱:氢灯能发出185～400 nm波长的光谱可作为紫外光光度计的光源。

物质的吸收光谱：

如果在光源和棱镜之间放上某种物质的溶液,此时在屏上所显示的光谱已不再是光源的光谱，它出现了几条暗线,即光源发射光谱中某些波长的光因溶液吸收而消失，这种被溶液吸收后的光谱称为该溶液的吸收光谱。

分光光度计

不同物质的吸收光谱是不同的.因此根据吸收光谱,可以鉴别溶液中所含的物质。

当光线通过某种物质的溶液时透过的光的强度减弱，因为有一部分光在溶液的表面反射或分散，一部分光被组成此溶液的物质所吸收只有一部分光可透过溶液。

入射光= 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透过光。

如果我们用蒸馏水(或组成此溶液的溶剂)作为"空白"去校正反射，分散等因素造成的入射光的损失则：