技术原理

荧光原位杂交技术的基本原理是如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸探针是同源互补的，二者经变性—退火—复性，即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛，可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析2。

技术要点

1.FISH选用的标本可以是分裂期细胞染色体，也可以是间期细胞3。

2.生物素、地高辛、Dinitrophenyl （DNP）、Ami-noacetyl Fluorine（AAF）等均可用于探针标记。近年来，大片段的DNA探针（100-400 kb）已被研制出来，由于控针较长，故可将荧光物质直接标记在核苷酸上，使杂交过程进一步简化，而且杂交信号更强3。

3.荧光原位杂交可以通过CCD（电荷耦合器件）相机系统或激光共聚焦扫描成像系统将摄取的信号存储在计算机中，经过软件特殊处理后显示在屏幕上。使用数码成像相机系统或CCD相机系统，灰度图像被拍摄几次并存储在计算机中，接下来通过一些人造色，软件系统接收获得的示例图像，经过软件的综合处理，最后以多色图像显示出来。此外，在G-带状染色体被75酒精或甲醇褪色后，FISH可以更清楚地识别易位3。

实验流程

1.样品采集

2.固定

3.制备载片

4.细菌预处理

5.第一次杂交

6.第一次洗脱

7.封片

8.检测结果：可使用荧光显微镜、激光扫描共聚焦显微镜等进行观察，结合相关软件，进行数据整理及分析1。

技术发展

荧光原位杂交技术起源于1969年，自1990年以来，FISH在方法上形成了从一种颜色到多种颜色、从中期染色体FISH到粗线染色体FISH再到纤维-FISH的发展趋势，灵敏度及分辨率有了大幅度提高3。

多色荧光原位杂交

多色荧光原位杂交（M-FISH）， “M”分别代表“Multi-color” “Multiplex”和“Multitar get”3种类型。M-FISH的最大特点是可以在单个 FISH 实验中进行多个繁琐的FISH实验和多个不同基因的定位。以下5种方法是基于多色彩FISH基础上开发的新技术：染色体描绘、比较基因组杂交、光谱染色体自动核型分析、交叉核素色带分析及多彩色原位启动标记3。