基本简介

基因工程靶向细胞疗法也称为生物免疫疗法中的 细胞治疗技术，是国际公认的最具应用前景的治疗技术之一。主要利用 DNA重组技术，将目的 基因与载体DNA在体外进行重组，然后把这种重组DNA分子引入受体细胞，并使之增殖和表达的技术。

步骤

将一种生物的DNA中的某个 遗传密码片段连接到另外一种生物的DNA链上去，将DNA重新组织一下，就可以按照人类的愿望，设计出新的遗传物质并创造出新的生物类型，这基因工程一般包括四个步骤：

取得符合人们要求的DNA片段，这种DNA片段被称为“ 目的基因”；

构建基因的 表达载体；

将目的基因导入受体细胞；

目的基因的检测与鉴定。

取得符合人们要求的DNA片段

要把 目的基因从供体 DNA长链准确地剪切下来，可不是一件容易的事。1968年， 沃纳·阿尔伯、丹尼尔·内森斯和 汉弥尔顿·史密斯第一次从大肠杆菌中提取出了限制性内切酶，它能够在DNA上寻找特定的“切点”，认准后将 DNA分子的双链交错地切断。人们把这种限制性内切酶称为“ 分子剪刀”。这种“分子剪刀”可以完整地切下个别基因。自1970年代以来，人们已经分离提取了 400多种“分子剪刀”。有了形形色色的“分子剪刀”，人们就可以随心所欲地进行DNA分子长链的切割了。

构建基因表达载体

DNA的分子链被切开后，还得缝接起来以完成基因的拼接。1967年，科学家们在5个实验室里几乎同时发现并提取出一种酶，这种酶可以将两个DNA片段连接起来，修复好DNA链的断裂口。1974年以后，科学界正式肯定了这一发现，并把这种酶叫作 DNA连接酶。从此，DNA连接酶就成了名符其实的“缝合”基因的“分子针线”。只要在用同一种“ 分子剪刀”剪切的两种 DNA碎片中加上“分子针线”，就会把两种DNA片段重新连接起来。

将目的基因导入受体细胞

把“拼接”好的 DNA分子运送到 受体细胞中去，必须寻找一种分子小、能自由进出细胞，而且在装载了外来的 DNA片段后仍能照样复制的 运载体。理想的运载体是质粒，因为质粒能自由进出细菌细胞，应当用“ 分子剪刀”把它切开，再给它安装上一段外来的 DNA片段后，它依然如故地能 自我复制。此方法适用于 植物细胞的基因工程。此外，将 目的基因导入 动物细胞可选用 显微注射法，导入微生物细胞可以使用 钙离子（如 氯化钙）处理细胞使其可以吸收外界的DNA分子。

目的基因的检测与鉴定

目的基因导入 受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测与鉴定才能知道。这是检测基因工程是否成功的一步。

首先，要检测 转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因。方法是采用 DNA分子杂交技术，即将转基因生物的基因组DNA提取出来，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等做标记，以此作为探针，使探针与基因组DNA杂交，如果显示出杂交带，就表明目的基因已插入染色体DNA中。该方法因发现者而命名为“Southern”印记。

其次，还需要检测目的基因是否 转录出了mRNA，检测方法同样是 分子杂交技术，与上述方法不同的是需从 转基因生物中提取mRNA，做上标记以进行检测。由于Southern印记名称的缘故，所以该方法被称为“Northern”印记。

最后，检测目的基因是否翻译成蛋白质。方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原－抗体杂交，若有杂交带出现，表明目的基因已经形成蛋白质产品。该方法又成为“Western”印记。