早年经历

王定宇，大学就读成功大学外文系，学生时代就参与学运，任学生会会长。

1994年，主持面向学生的青春formosa节目，成为受学生族群欢迎的人气主持人。

1996年，担任“立法委员”施明德、“国民大会代表”黄昭凯的办公室主任，活跃于民主进步党在台南市的基层活动。

从政生涯

从政初始

1998年以新人的姿态首度参选市议员，些微差距落选。2002年当选市议员，得票数呈倍增长，此后连选连任，积极参与地方事务，任期内深耕基层，尤重学生族群支持。王定宇和玉山网络电视执行长鱼夫合作，培训网络记者，运用因特网组织网络军团，问政形象鲜明，2005年更获12000多票该选区最高票连任，被视为民进党于台南政坛的明日政治之星。

机场滋扰

中正机场滋扰案2005年连战出访中国大陆，王与其他“台湾独立运动”人士发动群众至中正机场抗争，爆发流血冲突。2006年因涉及中正机场滋扰案，被桃园地检署依妨害公务及重伤害等起诉。遭判处四个月刑期、减刑二个月，得易科罚金

举发仁爱之家弊案2005年8月，王定宇举发台南市政府委外经营的仁爱之家弊端重重，浮编预算图利业者。检方与王定宇合作，松懈相关人士防备。经过长期的追查，一年后检方展开行动，声押前社会局长、时任民政局长蔡宽裕及前市议员陈勋明，台南地院羁押陈勋明，蔡宽裕交保2。

角逐第七届“立法委员”选举“立法委员”选举自第七届起，改为单一选区两票制，单一选区仅选出一位“立委”名额。2005年获得全市最高票市议员的王，在2007年积极参与第七届“立法委员”初选，挑战同党前辈，时任“立委”的赖清德。由于赖清德有意参选2009年的台南市长，却又无意将下届“立委”的名额让与同党有意角逐者，王对此颇不以为然，遂与赖进行党内初选，并积极参与主持“全国性”的政论节目大话新闻增加曝光率。赖清德控诉王在选举中抹黑，王反批赖所属的新潮流欺压同党同志，初选的结果王以极微小差距败于赖清德。

策划事件

张铭清访台遇袭事件2008年10月19日，厦门大学教授张铭清扺台进行学术交流，由于张同时具有海协会副会长的身分，王定宇策划群众包围张铭清抗争。王定宇透过电台节目发动群众在台南县市各景点，19日聚众包围担子面餐厅，迫使张更改行程。20日在台南艺术大学周围抗议，要求张就三鹿奶粉污染事件向台湾社会致歉。21日在台南孔庙找到进行不公开行程的张铭清，王定宇指挥群众往孔庙集结，结果场面失控，群众将张铭清推挤倒地，并加以拖行、殴打，造成张铭清腰部挫伤，震惊全台，各界哗然。尽管如此，隔日王定宇召开记者会，扬言海协会会长陈云林访台时将再次发动群众抗议，强调抗议的诉求为了台湾的下一代。而张铭清则取消后续行程，在纷争中提前离开台湾。

10月30日，台南地检署侦结张铭清遭推倒案，检察官以王定宇涉嫌聚众对张铭清胁迫且为首谋，求处有期徒刑一年二个月。承办检察官苏聪荣在起诉书中表示，王定宇等人表达对主权认知诉求，为言论自由范畴，但表达过程中竟有动手伤害并妨害他人行动自由等强暴胁迫行为，且对象是大陆海协会副会长，已造成一般社会大众不安，影响所及，将来大陆地区人民来台，也会担心安危。

个人生活

2022年6月29日，王定宇在社交媒体宣布确诊新冠肺炎3。

人物事件

被实施惩戒措施

2022年8月16日，中共中央台办发言人受权宣布对列入清单的一批“台独”顽固分子等人员实施制裁。其中，决定对王定宇采取以下惩戒措施：禁止其本人及家属进入大陆和香港、澳门特别行政区，限制其关联机构与大陆有关组织、个人进行合作，绝不允许其关联企业和金主在大陆谋利，以及采取其它必要的惩戒措施，依法终身追责1。