提取的难点

从土壤中提取的DNA，是微生物、动植物遗体等的总DNA，同时，腐殖物质的性质与DNA很相似，DNA提取过程中会将腐殖等物质一起纯化，采用传统的DNA提取方法来除去腐殖物质等抑制因子是十分困难的。而这些腐殖物质会抑制聚合酶链式反应（PCR）及限制性酶切等。因而，从土壤中提取DNA，腐殖物质等抑制因子的除去干净是重中之重。某公司根据腐殖物质等特点，发明了高效的腐殖酸吸附剂，再与硅胶柱纯化的技术结合，开发出了高效土壤DNA提取试剂盒（SoilDNAKit），已为广大客户所采用，完全能够替代价格昂贵的进口产品。

原理与操作

土壤样品加入悬浮缓冲液Buffer C1，并加入玻璃珠与专利的腐殖酸吸附剂Buffer C2，涡旋使土壤充分重悬，腐殖物质充分释放，让吸附剂有效吸附腐殖酸。再加入高效的裂解液Buffer C3并涡旋在玻璃珠的摩擦作用下，裂解土壤中的所有生物包括G+细菌、酵母菌、真菌、藻类、线虫甚至真细菌的孢子、芽孢、动植物遗体等，游离DNA。之后，再加入沉淀剂Buffer C4，离心沉淀除去土壤残渣、吸附有腐殖酸的吸附剂、多糖多酚、绝大部分的色素等，获得清亮的、含有DNA的上清，上清加入异丙醇沉淀获得DNA粗品。粗品中加入ddH2O溶解后，再加入Buffer C5离心进一步除去腐殖酸等杂质，获得上清，往上清加入乙醇后转移到硅胶纯化柱中过柱吸附DNA，除去杂质。再加入漂洗液Buffer WB离心进一步除去蛋白质、腐殖酸等杂质，加入漂洗液DNA Wash Buffer除去盐分等。干燥柱子后加入灭菌去离子水后，离心获得高纯的DNA。

试剂盒组成

应用实例

图1

腐殖酸吸附剂使用效果比较：

Buffer C2为独特的腐殖酸吸附剂，在裂解时加入Buffer C2。图1，为样品裂解后离心获得的上清，加有Buffer C2的裂解液明显颜色浅很多。

1,2：裂解时加有Buffer C2

3,4：裂解时不加Buffer C2

图2

裂解液加Buffer C4进一步沉淀除杂效果：

上一步获得的裂解液上清加入Buffer C4进一步处理，沉淀离心除杂，裂解时加有Buffer C2(腐殖酸吸附剂）的，再经Buffer C4处理几乎不再有染色，而不加Buffer C2的颜色还很深。

1,2：裂解时加有Buffer C2

3,4：裂解时不加Buffer C2

图3 土壤DNA&amp

图3为不同样品的土壤样品用不同方法所提的DNA