莱克多巴胺检测卡
莱克多巴胺(Ractopamine hydrochloride)又称激动剂,是一种苯酚胺类β-肾上腺素兴奋剂,其结构以两种非对应异构形式存在,分别为RS、SR、RR 和SS。市场销售的莱克多巴胺为其盐酸盐,是RS、SR、RR、SS 4 种异构体的混合物。莱克多巴胺与“瘦肉精”克伦特罗一样,也是一种营养再分配剂,还能促进胰岛素的释放,使糖原分解增加,因此能利用合成脂肪的能量和成分来增加蛋白质的合成。
基本信息
动物源性食品中违禁药物(如β-激动剂、激素、抗生素和精神类药物等)的残留已成了困扰世界范围内食品卫生的难题。药物残留不仅影响我国畜禽产品的出口贸易,同时威胁着消费者的健康。许多国家以兽药残留监控为技术壁垒,阻止我国畜产品的正常出口。随着政府加强了对“瘦肉精”的监控力度,有效打击了生猪养殖中非法使用“瘦肉精”的行为。但是在养殖业中,莱克多巴胺的使用悄然兴起并呈现滥用趋势。
作用机制
20 世纪80 年代的一系列动物试验表明,莱克多巴胺过量使用的情况下表现为营养再分配效应,尤其是当用药量为治疗剂量的5-10倍时,能改变养分的代谢途径,促进动物肌肉生长,促进动物体蛋白质沉积,特别是骨骼肌中蛋白质的合成,抑制脂肪的合成和积累,促使营养成分由脂肪向肌肉转移,瘦肉可相对增加10%以上。进一步研究发现,莱克多巴胺的效应与动物种属有关,就常见的饲养动物如牛、猪、羊和家禽等而言,对猪的效应尤为明显,可诱发猪体内脂肪组织分解和骨骼肌增生,饲料中添加μg/g 水平的莱克多巴胺,即可引起猪背最长肌和臀部骨骼肌肥大,腹脂减少。
莱克多巴胺作用的机制是其与β-受体结合引起受体兴奋,激活腺苷酸环化酶,生成cAMP。cAMP 作为第二信使触发一系列生化反应,从而达到营养再分配的目的。有研究表明,使用莱克多巴胺后,猪背最长肌中的RNA 浓度,RNA/DNA 代表的DNA转录活性比值显著上升,表明莱克多巴胺可能在转录或翻译水平促进了蛋白质的合成。另外,莱克多巴胺表现为能增强猪股二头肌中Na+、K+-ATPase 活性,提高细胞内外Na+、K+梯度,促进氨基酸转运进入细胞内,为蛋白质合成提供更多底物。cAMP 浓度的增加还降低了肌肉和肝脏细胞内Ca2+浓度,减缓肌肉蛋白的降解。同时发现,莱克多巴胺可能与细胞膜上β-受体结合,使皮下脂肪中cAMP 含量显著增加,进而通过cAMP 刺激脂肪分解,抑制脂肪合成。
毒性研究
由于莱克多巴胺具有营养再分配作用,可明显提高瘦肉率,经济回报高,作为一种新型促生长添加剂可能在畜产品生产中使用,很多经营商和养殖户普遍使用。但与克仑特罗一样,莱克多巴胺也是β-肾上腺素兴奋剂,属违禁药物,而且由于用作生长促进剂时的剂量是治疗量的5-10 倍,莱克多巴胺易在动物组织,特别是内脏中积聚残留,并通过食物链进入人体。人体中累计摄入剂量超过一定值,或食入莱克多巴胺高残留100 ng/g 的内脏组织如肝、肾、或肺时,易出现毒副反应,出现中毒症状。
质量标准
许多国家都将莱克多巴胺列为违禁物,除了美国批准其可作为猪的饲料添加剂外,欧盟、中国、日本等多数组织和国家已禁止在畜禽生上使用。2002年3月农业部、卫生部、国家药监局第176号公告(《禁止饲料和动物饮用水中使用的药物品种录》),2003 年12月农牧药便函〔2003〕330 号“关于组织查处β-兴奋剂类药物PAYLEAN(莱克多巴胺)”的函,明确规定禁止使用莱克多巴胺。2009 年12月4日中国商务部及中国海关总署在发布了2009 年第110 号公告:根据《中华人民共和国对外贸易法》及《中华人民共和国货物进出口管理条例》等法律法规规定,自2009年12月9日起,禁止进出口莱克多巴胺和盐酸莱克多巴胺。
莱克多巴胺能使骨骼肌收缩增强,破坏快缩肌和慢缩肌纤维间的融合现象,引发肌肉震颤,四肢和面部肌肉最明显。通常表现为面色潮红、头痛、头晕、胸闷、心悸、四肢麻木等不良反应,其它中毒症状还包括心动过速、心率失常、腹痛、肌肉疼痛、恶心和晕眩等。对患有高血压、青光眼、糖尿病、前列腺肥大等疾病的患者危害更大,严重的可能危及生命。
检测方法
由于利益趋势,在饲料或饲养过程中违法使用莱克多巴胺的现象屡禁不断。同时莱克多巴胺检测标准和检测方法比克仑特罗滞后,控制非法使用的难度相对较大。因此完善莱克多巴胺的检测方法,研究和开发莱克多巴胺的分析技术,对于临床药物代谢研究、食品安全检测中有效监督该药的非法滥用是一项非常紧迫的任务,具有重要的现实意义。国内外文献报道的莱克多巴胺残留检测方法主要有:酶联免疫吸附测定法(ELISA)、胶体金免疫层析法、高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用、色谱法、毛细管电泳法、免疫传感器法、检测卡等。
检验原理
采用竞争抑制免疫层析法,在硝酸纤维素膜(NC膜)上包被检测线(T线)和对照线(C线),T线包被Rac-BSA,C线包被羊抗鼠IgG,样品孔加入样本后,在层析的过程中,样本中的莱克多巴胺(Rac)与胶体金标记的鼠抗莱克多巴胺单抗结合,抑制了胶体金标记的鼠抗莱克多巴胺单抗和NC膜T线上的Rac-BSA的结合,由此判断样本中是否含有莱克多巴胺(Rac)。