循环DNA
血中cfDNA简称循环核酸（circulating nucleic acid），是指循环血中游离于细胞外的部分降解了的机体内源性DNA。在这里，循环核酸不可顾名思义为循环血中的核酸类物质，所有细胞内的核酸，血中游离的内源性脱氧核糖核酸和外源性DNA与RNA，如真菌血症、细菌血症和病毒血症等病理情形下的血中外源核酸，虽然其在临床医学中具有重要意义但均不属于严格意义的血中cfDNA范畴。
基本信息
- 中文名
循环DNA
- 外文名
Circulating Nucleic Acid
- 发现人
Mandel和Metais
- 发现日期
1947年
- 简称
循环核酸
简介
循环核酸最早由 Mandel和Metais于1947年发现（Les acides nucl´eiques du plasma sanguin chez l’homme[J].C R Hebd Seances Acad Sci(Paris), 1948, 142(3): 241-3），但由于缺乏高灵敏性和高特异性的实验方法，导致有关血中cfDNA与疾病相关性的研究在较长时期内进展缓慢。直到有效分离cfDNA技术的出现，和特殊荧光染料与PCR技术相结合的检测技术的应用，使这一领域的研究在最近二十多年得到了较迅速发展。自发现血中cfDNA可含肿瘤细胞DNA相同基因突变后，应用分子生物学手段对循环游离核酸的研究的兴趣日益增加。
血浆游离核酸纯化试剂盒
1.在两个1.5ml离心管（用户自备）中加入20µl蛋白酶K贮存液，再加入200µl同一个血浆样本。
*不要将蛋白酶K直接加入到BufferVL中。
2．分别加入200µl含CarrierRNA的BufferVL，旋涡振荡约15秒混匀。
3.将离心管置于56°C水浴10分钟。
4.分别加入320µl无水乙醇，温和地翻转4~6次混合均匀。
*为避免打开管盖时样品间的交叉污染，开盖前可低速离心数秒，使管盖上的溶液沉降到管底。
5.吸取步骤4中的一管混合液加入到核酸纯化柱中（核酸纯化柱置于2ml离心管中），盖上管盖，12000rpm离心30秒。
*注意不要将溶液沾到纯化柱管口的边缘上，以免后续的洗涤步骤不能洗净纯化柱。
6．弃2ml离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml离心管中，将步骤4中的另一管混合液加入到同一个核酸纯化柱中。
*滤液无须彻底弃尽，如果要避免粘附在离心管管口的滤液对离心机的污染，可将2ml离心管在纸巾上倒扣拍击一次。
7．弃2ml离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml离心管中，在核酸纯化柱中加入500µlBufferWA,盖上管盖，12000rpm离心30秒。
*确认在BufferWA中已经加入无水乙醇。
8．弃2ml离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml离心管中，在核酸纯化柱中加入700µlBufferWB,盖上管盖，12000rpm离心30秒。
*滤液无需彻底弃尽，如果要避免粘附在离心管管口的滤液对离心机的污染，可将2ml离心管在纸巾上倒扣拍击一次。
*确认在BufferWB中已经加入无水乙醇。
9．弃2ml离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml离心管中，14000rpm离心1分钟。