介绍

Westernblot法

是美国斯坦福大学的乔治·斯塔克发明的，Western Blot法的名字就由发明者Southern与印迹的对象DNA相结合得出的Southern blot。后来又出现了两个过程相似但对象不同的印迹方法，一个针对RNA，一个针对蛋白质，这两种技术分别被称为Northern和Western，Western Blot法的叫法最终被确定下来。

W前世

Westernblot法

生物大分子印迹法实际上是凝胶电泳技术、固定化技术及分子亲和技术三者融为一体的综合性技术，其核心在于把凝胶电泳已分离的区带转移并印迹于固定化纸上。生物大分子印迹法始创于1975年，内苏格兰爱丁堡大学E.M.Southern首先提出。他将限制酶切后的DNA片段先进行琼脂糖凝胶电泳，把一张硝酸纤维素纸放在凝胶上，利用毛细作用原位凝胶中的DNA把片段转移到硝酸纤维素纸上使之固定化。由于这种技术类似用吸干作品上的墨迹，使吸墨纸染上墨迹而被称为印迹法(blotting)。1979年，Towbin等人利用电洗脱装置作为印迹动力，首先把Westernblot法用于抗原捡出，并称之为免疫印迹法(immunoblotting)。对应于Southern(DNA分子杂交)、Northern(RNA分子杂交)。1981年Burnette把免疫印迹法称为Western blotting即蛋白质印迹法-Westernblot法。2

应用

Westernblot法应用分子生物学、生物化学和免疫遗传学中时常会用到的一种实验方法，并且是一种能对蛋白进行定性和半定量的分析方法。是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，并且通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。蛋白质分析中应用的W estern杂交法与DNA分析应用的Southern杂交法相似，均是把电流分离的组分从凝胶转移至一种固相支持体，并均以针对特定氨基酸(Westernblot法)或核苷酸(Southern杂交法)序列所制备的特异性样品作为探针检测其相同或相似序列。对于蛋白质来说，通常使用的探针是抗体，它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。Westernblot法的主要优点在于，它能够从生物组织的粗提物或部分纯化的粗提物中检测和识别几种特异的蛋白质。将聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分离的蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶上通过电转移到一张合适的印迹膜上，随后用和灵敏检测系统相偶联的抗体来识别结合在膜上的一种或几种蛋白质。这一技术的灵敏度能达到标准的固相放射免疫分析的水平而又无需像免疫沉淀法那样必须对靶蛋白进行放射性标记。因此要对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特定蛋白进行鉴别和定量时，Westernblot法极为有用。此外，由于蛋白质的电泳分离几乎总在变性条件下进行，因此溶解、聚集以及靶蛋白与外来蛋白的共沉淀等诸多问题全都无需加以考虑。

仪器

伯乐生命bio-rad-Trans-Blot 转印槽是一种多功能仪器，适用于多种Westernblot法应用。功能和优点：能进行多胶转印多组参数灵活可设，可调节的电压设置（从30V的过夜转印到到 200 V的1 小时快速实验）。电极间距设置为8cm可用于标准转印，设置为4cm用于高强度转印。采用特级冷却芯和水循环冷却装置来调节温度－是天然酶（4°C）或高强度转印的理想选择，随着转印时间增加（多达24小时），不会引起缓冲液耗竭。带铰链的凝胶制胶转印夹能避免滑动，确保凝胶和印迹膜的紧密接触。每个转印夹都有颜色标记以保证在转印槽的正确定位。应用和用途：Western 杂交，核酸转印。2

参考资料