• 1.摘要
  • 2.基本信息
  • 3.主要用途
  • 4.制备方法

loading buffer

loading buffer 的中文名字叫上样缓冲液,6*的缓冲液中可以显示两条带,前面的紫蓝色的条带是溴酚蓝,在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中,溴酚兰的迁移率分别与1Kb、0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同;后面的蓝色条带是二甲苯氰,它在1%和1.4%琼脂糖中电泳时,其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似。而对于PAGE胶他们的迁移速率也分别不同。

基本信息

  • 中文名

    上样缓冲液

  • 外文名

    loading buffer

  • 配制量

    5mL

  • 配制方法

    5×SDS-PAGE Loading Buffer

主要用途

loading buffer的功能主要有两个。第一,里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯氰FF起到指示的作用,显示电泳的进程,以便我们适时终止电泳;第二,里边的成分甘油可以加大样品密度,使样品密度大于TAE,从而沉降到点样孔中,防止样品飘出点样孔。另外,有的Buffer是加有SDS的,一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性,因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。细胞裂解后的裂解液,加loading 100℃加热,也是为了中止酶促反应,防止提取的蛋白质降解。

制备方法

6×loading buffer 一般配置:

6×Loading buffer:

30mM EDTA

36%(v/v) Glycerol

0.05%(w/v) Xylene Cyanol FF

0.05%(w/v) Bromophenol Blue

主要用于DNA电泳

10×Loading buffer:

30mM EDTA

50%(v/v) Glycerol

0.25%(w/v) Xylene Cyanol FF

0.25%(w/v) Bromophenol Blue

主要用于RNA电泳

10 X loading buffer中仅有色素溴酚蓝(Bromophenol Blue)一种染料(浓度0.05%);

6 X loading buffer中含色素溴酚蓝(Bromophenol Blue)、二甲苯腈蓝FF(Xylene Cyanol FF)两种染料(浓度都是0.05%)

在琼脂糖凝胶(0.5% ~ 1.4%)中溴酚蓝(Bromophenol Blue)约与300 bp的双链线状DNA的迁移速度相同,二甲苯腈蓝FF则与4 kbp的双链线状DNA的迁移速度相等。