疯牛病简介

患疯牛病的奶牛

疯牛病是主要发生在成年奶牛中的一种亚急性进行性神经系统疾病，以潜伏期长、病情逐渐加重、中枢神经系统退化、最终死亡为特征。疯牛病于1985年首先在英国发现，然后传播到欧洲及世界多个国家和地区，给全世界的养牛业造成了巨大损失，并影响到牛源材料相关的工业。特别是随着疯牛病的流行，由同一致病因子引起的人的新型克一雅氏病(俗称人类疯牛病)出现，导致了全世界对疯牛病的恐慌，给动物和人类健康及国际政治经济等领域带来全球性影响。2

症状

疯牛病可表现为神经症状和全身症状，神经症状常较全身症状出现更早。常见的神经症状有行为异常、共济失调和感觉过敏。行为异常主要表现为离群独处、焦虑不安、恐惧、狂暴或沉郁、神志恍惚、不自主运动(如磨牙、肌肉抽搐、震颤和痉挛等)、不愿通过水泥地面、拐弯、进人畜栏、过门或挤乳等。病畜当有人靠近或追逼时往往出现攻击行为，这也是其俗称疯牛病的一个重要原因。2

疯牛病的共济失调主要表现为后肢运动失调，于急转弯时尤为明显。患牛快速行走时步态异常，同侧前后肢同时起步，而后发展为行走时后躯摇晃、步幅短缩、转弯困难、易摔倒，甚至起立困难或不能站立而终日卧地。感觉过敏常表现为对触摸、光和声音过度敏感，用手触摸或用钝器触压牛的颈部、肋部时，病牛会异常紧张、颤抖，用扫帚轻碰后肢，也会出现紧张的踢腿反应，病牛听到敲击金属器械的声音，会出现震惊和颤抖反应，病牛在黑暗环境中对突然打开的灯光，会出现惊恐和颤抖。这是疯牛病病牛很重要的临床诊断特征。50%的病牛在挤乳时乱踢乱蹬。在安静环境中，病牛感觉过敏症状明显减轻，其他神经症状也可有所缓解。2

70%~73%的病牛出现的全身症状是体重下降和产奶量减少，绝大多数病牛后期出现心率缓慢(平均50次/min)，呼吸频率增快，强直性痉挛，粪便坚硬，两耳对称，性活动困难。从最初出现症状到患牛死亡或急宰，病程可持续几周到12个月[4。病理解剖肉眼变化不明显，肝脏等实质器官多无异常。病理组织学变化主要局限于中枢神经系统，其特征主要有：脑干灰质两侧呈对称性病变，脑灰质呈空泡变性、神经元消失和原胶质细胞肥大，神经纤维网有中等数量、不连续的卵形和球形空洞，神经细胞肿胀成气球状，细胞质变窄。另外，还有明显的神经细胞变性及坏死。神经细胞发生凋亡并形成空泡状结构，使有关信号传导发生紊乱，从而使动物表现出自主运动失调、恐惧、生物钟紊乱等神经症状。2

病原

早期的研究没有成功分离到疯牛病和其他相关疾病的病原，也没有检测到与感染有关的免疫反应。虽然提出了杀虫剂和自身免疫反应等假说，但这些理论都不能解释疯牛病病原的特性。20世纪80年代，美国生物学家普鲁塞纳在疯牛病的研究中发现疯牛病的传染完全是朊病毒(又称朊蛋白)，一种奇特的无核酸的蛋白侵染颗粒的作用，而没有其他基于RNA或DNA的作用。2

朊病毒

主要分布在病牛的脑、颈部脊髓、脊髓末端等中枢神经系统，脾、淋巴结、肌肉和血液中较少，除此以外，包括外周神经在内的40多种组织中都很难检测到其分布。研究表明，1g疯牛病病牛的脑组织经口摄入就可引起牛发病，而1g纯的朊病毒抽提物可使1000万头牛感染发病。朊病毒可被2%~5%的次氯酸钠或90%的石炭酸经24h处理灭活，而紫外线、离子辐射、超声波、非离子型去污剂、蛋白酶等能使普通病毒灭活的理化因子却具有较强的抗性。2

朊病毒的诊断

根据脑部受破坏的区域不同，朊病毒所致人类的库鲁病、克雅氏综合症等发病的症状也不同，如果感染小脑，则会引起运动机能的损害；如果感染大脑皮层，则会引起记忆下降，最后进行性死亡。病理改变多发生在中枢神经系统，伴弥漫性神经元退行性变和大脑皮质或神经节的海绵样变。朊病毒的诊断除了根据特有的临床特征和病理学诊断外，要依靠实验室的诊断。3

检测方法

实验室检测朊病毒的方法有很多种，动物传递实验是早期判断是否感染朊病毒的方法，它除了可以判断人或者动物是否感染朊病毒之外还可以判断感染的滴度和毒性。但是因为动物实验耗时长，费用高，误差大，所以已经逐渐被更快速准确的其他方法所替代了。将蛋白检测技术和解剖学保存技术相结合的组织印迹技术可以用于检测微量朊病毒，灵敏度和准确性都很高，但在临床上需要采取组织标本，不适于快速检测。斑点印迹法也需要组织样本，且灵敏度较低，但是操作简单，对设备要求也不高，适合大量样本筛查。免疫印迹可以鉴定标本中特定的成分和显示电泳图谱，简单快速，对设备要求也不高，有早期诊断价值，所以被广泛使用。免疫组化是一种被研究人员反复改进的成熟方法，优点众多，已成为确诊TSE病的金标准。3

朊病毒实验室确诊的依据主要是脑组织中有PrPSc蛋白的检出，目前最常用的就是免疫组化和免疫印迹两种方法。免疫学方法因为灵敏度高、特异性强、方法多样化，目前已经是检测朊病毒的广泛使用的主要方法了。其中酶联免疫吸附试验采用间接法和双抗体夹心法来检测抗原，方法快速、特异、灵敏、可定量、自动化等特点非常适合大批量样本的筛查。此外，目前在血液样本中具有较高敏感性且能够对病毒进行检查的方式为PCR核酸检测技术，这种技术对全血具有很高的敏感性，且是最有可能检查出血液中是否病毒的一项技术，因此被广泛地应用到捐赠血液的检查中，但是因为朊病毒的主要成分是蛋白质，检查核酸的一些检测方式很难检测出朊病毒。因此，在很长一段的时间内，如何从血液中快速检测朊病毒成为了医学界的难题。毕竟依据唯蛋白假说朊病毒都是由蛋白质组成，其主要成分为PrPSc，也是朊蛋白的一个亚型之一。在目前对朊病毒的研究中发现，PrP（prionprotein）是影响朊病毒感染的重要因素，造成传染性海绵状脑病需要PrP（prionprotein）参与其中，在Kocisko等（1994年）对PrPSc的研究中发现，PrPSc会促使PrPC转变成PrPSc，因此为朊病毒检测奠定了基础，虽然不能利用核酸检测方法确定病毒类型，但是却能够通过对蛋白质的错误折叠方式进行朊病毒检测，也就形成了现如今经常用于检测朊病毒的类“PCR”高灵敏度检测方法，这种方法的全称为蛋白质错误折叠循环扩增技术（PMCA），此技术为临床检测是否有朊病毒感染提供了依据。3

疯牛病的诊断

临床诊断

疯牛病的平均潜伏期为4~6a，一旦发病，病牛呈亚急性或慢性进行性功能紊乱，病初食欲、体温接近正常，随着中枢神经系统渐进性病变的加剧，呈现典型的神经症状，随后出现全身症状。常见的神经症状是行为异常、共济失调和感觉异常。有人认为，如果病牛同时表现出上述3种症状并且症状超过1个月时，就可认为该牛患了疯牛病。行为异常主要表现为离群独处、焦虑不安、恐惧、狂暴或沉郁、神志恍惚、不自主运动(如磨牙、肌肉抽搐、震颤和痉挛等)、不愿通过水泥地面、拐弯、进人畜栏、过门或挤乳等。病畜当有人靠近或追逼时往往出现攻击行为。共济失调主要表现为姿势和运动异常，占病例的3%左右。病牛后肢运动失调，于急转弯时尤为明显。2