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《中华人民共和国出入境检验检疫行业标准:出口动物毒素(东亚钳蝎毒)检验方法(SN/T 1040-2002)》由中国标准出版社出版。

文摘

版权页： 插图： 6.5.1方法提要：利用碱性溶液中的铜试剂与样品中的蛋白质形成的铜一蛋白质复合物来还原磷钼酸一磷钨酸试剂，得到蓝色的反应液，在650nm波长处测其吸光值，经标准曲线计算样品蛋白质含量。 6.5.2试剂配制 a）4%碳酸钠溶液：取4g碳酸钠，加蒸馏水溶解成100mL。 b）0.2mol∕L氢氧化钠溶液：取0.8g氢氧化钠，加蒸馏水溶解成100mL。 c）0.04mol∕L硫酸铜溶液：取1g硫酸铜（CuSO4·5H2O），加蒸馏水溶解成100mL。 d）2%酒石酸钾（或0.1mol∕L酒石酸钠）溶液：取2g酒石酸钾（或酒石酸钠），加蒸馏水溶解成100mL。 e）碱性铜液：临用前，取试剂a）和b）各25mL，试剂c）和d）各0.5mL混匀配制而成。 f）酚试剂：称取100ml，钨酸钠（Na2WO4·2H2O），25g钼酸钠（Na2MoO4·2H2O），置1500mL烧瓶中，加入700mL蒸馏水，50ml，85%磷酸及100mL浓盐酸，上联网流管（使用软木塞或锡纸包裹 的橡皮塞），微沸回流10h，取下回流管，加150g硫酸锂，50mL蒸馏水和几滴溴液，煮沸约15min，驱除过量的溴。冷却，加蒸馏水稀释至1000mL，过滤，为酚试剂贮备液。 酚试剂贮备液经标准氢氧化钠溶液滴定，测定酸浓度，而后用蒸馏水稀释至相当于1mol∕L盐酸浓度，即为酚试剂。 g）标准蛋白质溶液：取牛血清白蛋白标准品，用含0.02%叠氮钠（NaN3）的蒸馏水准确稀释至1mg∕mL，为标准蛋白质贮备液。精确量取标准蛋白质贮备液2.5mL于25mL烧瓶中，用含0.02%叠氮钠（NaN3）的蒸馏水稀释至刻度，即为100μg∕mL的标准蛋白质溶液。 6.5.3操作程序 6.5.3.1样液制备：取适量样晶，用含0.02%叠氮钠（NaN3）的蒸馏水准确稀释至100μg∕mL，再精确最取适量体积（含蛋白质50μg左右）于试管中，加5ml碱性铜液，混匀，于室温放置10min，快速加入0.5mL酚试剂，摇匀，于室温放置30min，在650nm波长处测定吸光值（呈色后，如发现混浊，经3000r∕min离心15min后，再行测定）。 6.5.3.2标准曲线制作：精确量取100μg∕mL的标准蛋白质溶液：0，0.2，0.4，0.6.0.8,1.0mL，分别置于试管巾，加蒸馏水补至1mL，其余操作同6.5.3.1。以各管中的标准蛋白质溶液的吸光值为纵坐标，测定用的毫升数为横坐标作图，即可得到一标准曲线。 6.5.3.3结果计算与表述 蛋白质含量以微克每毫克（μg∕mg）表示。 根据测得的样液的吸光值，从标准曲线查出相当的标准蛋白质溶液的毫升数，按式（4）计算结果 X3=V1×100∕V2×0.1………………（4） 式中：X3——样品蛋白质含量，μg∕mg； V1——样液的吸光值在标准曲线上查得的相当标准蛋白质溶液的毫升数； V2——用于吸光值测定的样液的毫升数。 6.6透明质酸酶活性测定 6.6.1方法提要：透明质酸酶能水解透明质酸，使其分子量变小，水溶性增大，浊度降低。通常以浊度降低表示酶的活性，并以125μg底物在37℃被酶水解，使其浊度降低50%的酶量作为一单位。通过测定底物酶作用前、后的光密度，求得酶的活性单位。 6.6.2操作程序 6.6.2.1试剂配制 试剂A：0.1mol∕L，pH6.0乙酸缓冲液，含有0.065mol∕L氯化钠。 试剂B：0.035mol∕L溴化十六烷基三甲铵，使用0.05mol∕L，pH4.2乙酸缓冲液配制。

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