基本介绍

内容简介

《动物细胞培养——基础技术和特殊应用指南》是迄今有关动物细胞培养技术、设备、原理与实践的最全面的资料源泉，是细胞培养基本方法领域的领衔之作。

作者简介

本书作者R. I. 弗雷谢尼博士是格拉斯哥英国Eeatson癌症研究实验室肿瘤学与应用药理学中心的荣誉资深研究员。迄今已出版多部专著。是细胞培养技术领域的世界著名专家。

图书目录

译者的话 前言与致谢 缩略语 图片目录 彩版目录 方案目录 第1章 绪论 1 1.1 历史背景 1 1.2 组织培养的优点 7 1.2.1 环境控制 7 1.2.2 样品的特征和均一性 8 1.2.3 经济、规模和机械化 8 1.2.4 体内环境的体外模拟 8 1.3 局限性 9 1.3.1 专业技能 9 1.3.2 量的问题 9 1.3.3 去分化和选择 10 1.3.4 细胞的起源 10 1.3.5 不稳定性 10 1.4 体外的主要差异 10 1.5 组织培养的类型 11 第2章 培养细胞的生物学 14 2.1 培养细胞的环境 14 2.2 细胞黏附 14 2.2.1 细胞黏附分子 15 2.2.2 细胞间连接 16 2.2.3 细胞外基质 16 2.2.4 细胞骨架 18 2.2.5 细胞迁移 18 2.3 细胞增殖 18 2.3.1 细胞周期 18 2.3.2 细胞增殖的调控 19 2.4 细胞分化 20 2.4.1 细胞分化的维持 21 2.4.2 细胞去分化 21 2.5 细胞信号传递 24 2.6 能量代谢 25 2.7 培养细胞的起源 26 2.7.1 培养的开始 26 2.7.2 细胞系的演化 27 2.7.3 细胞的衰老 28 2.7.4 连续细胞系的转化与形成 28 第3章 实验室设计、布局及设备 30 3.1 布局、规划和服务设施 30 3.1.1 要求 32 3.1.2 服务设施 34 3.1.3 通风装置 35 3.2 布局 35 3.2.1 无菌操作区 36 3.2.2 层流原理 36 3.2.3 工作台 36 3.2.4 检疫室和防范室 36 3.2.5 培养 37 3.2.6 准备区 40 3.2.7 储存 41 第4章 设备及材料 44 4.1 组织培养实验室的要求 44 4.2 无菌区 46 4.2.1 洁净台 46 4.2.2 手推车 48 4.2.3 无菌液操作——移液和分装 49 4.2.4 倒置显微镜 53 4.2.5 CCD摄像机和监视器 54 4.2.6 解剖显微镜 54 4.2.7 离心机 54 4.2.8 细胞计数 55 4.3 细胞孵育和培养 55 4.3.1 恒温箱 55 4.3.2 湿式CO2培养箱 56 4.3.3 温度记录仪 57 4.3.4 滚动架 57 4.3.5 磁力搅拌器 58 4.3.6 培养器皿 58 4.4 实验准备和杀菌 58 4.4.1 清洗 58 4.4.2 培养基和试剂的制备 59 4.4.3 杀菌 61 4.5 储存 63 4.5.1 消耗品 63 4.5.2 冰箱和冷冻箱 63 4.5.3 冷藏器 64 4.5.4 可控速率冷冻箱 64 4.6 附属设备 64 4.6.1 计算机和网络 64 4.6.2 普通正置显微镜 65 4.6.3 低温冷冻箱 65 4.6.4 共聚焦显微镜 65 4.6.5 PCR循环仪 65 4.7 专用设备 66 4.7.1 显微注射装置 66 4.7.2 集落计数器 66 4.7.3 可离心淘洗机 66 4.7.4 流式细胞仪 66 第5章 无菌技术 67 5.1 无菌技术的目标 67 5.1.1 微生物污染的风险 67 5.1.2 无菌的维持 67 5.2 创造无菌环境的各种因素 68 5.2.1 层流 69 5.2.2 安静的工作区域 71 5.2.3 工作面 71 5.2.4 个人卫生 73 5.2.5 试剂和培养基 73 5.2.6 培养物 73 5.3 灭菌操作 73 5.3.1 擦拭 73 5.3.2 加盖 74 5.3.3 灼烧 74 5.3.4 试剂瓶和培养瓶的操作 74 5.3.5 移液 75 5.3.6 液体倾倒 75 5.4 标准操作程序 76 5.5 仪器和设备 82 5.5.1 培养箱 82 5.5.2 盒装培养物 82 5.5.3 充入CO2气体 82 第6章 安全性、生物伦理及验证 83 6.1 实验室安全 83 6.2 危险性评估 83 6.3 标准操作程序 85 6.4 安全规则 85 6.5 常规安全 86 6.5.1 操作者 87 6.5.2 设备 87 6.5.3 玻璃器皿和锐利物品 87 6.5.4 化学毒性 88 6.5.5 气体 89 6.5.6 液氮 89 6.5.7 灼烧 90 6.6 火 90 6.7 放射性 91 6.7.1 摄入 91 6.7.2 放射性废弃物的处理 91 6.7.3 标记的试剂 91 6.7.4 高能源 91 6.8 生物危害性 92 6.8.1 生物防范水平 92 6.8.2 微生物学安全通风橱（MSC） 94 6.8.3 人体活检材料 96 6.8.4 遗传操作 97 6.8.5 生物危害性废弃物处理 97 6.8.6 熏蒸 97 6.9 生物伦理 98 6.9.1 动物组织 98 6.9.2 人体组织材料 98 6.10 质量保证 99 6.10.1 操作程序 100 6.10.2 质量控制（QC） 100 6.11 验证 100 6.11.1 鉴定 100 6.11.2 来源 101 6.11.3 污染 101 第7章 培养器皿和附着物 102 7.1 附着物 102 7.1.1 细胞的附着和生长 102 7.1.2 常见的附着材料 102 7.1.3 其他替代性附着物 103 7.2 表面处理 103 7.2.1 基质覆盖 103 7.2.2 饲养层 105 7.2.3 非黏附性附着面 106 7.3 培养器皿的选择 107 7.3.1 细胞产量 107 7.3.2 悬浮培养 109 7.3.3 通风 110 7.3.4 取样和分析 111 7.3.5 不均匀生长 112 7.3.6 价格 112 7.4 特殊系统 112 7.4.1 渗透性支持物 112 7.4.2 三维基质 113 第8章 成分明确培养基及补充物 115 8.1 培养基的发展史 115 8.2 物理化学特征 115 8.2.1 pH 115 8.2.2 CO2和碳酸盐 116 8.2.3 缓冲作用 123 8.2.4 氧气 123 8.2.5 渗透压 124 8.2.6 温度 124 8.2.7 黏滞度 125 8.2.8 表面张力和成泡性 125 8.3 平衡盐溶液 126 8.4 完全培养基 126 8.4.1 氨基酸 127 8.4.2 维生素 127 8.4.3 盐类 127 8.4.4 葡萄糖 128 8.4.5 有机补充物 128 8.4.6 激素和生长因子 128 8.4.7 抗生素 128 8.5 血清 129 8.5.1 蛋白质 130 8.5.2 生长因子 131 8.5.3 激素 131 8.5.4 营养物及代谢物 132 8.5.5 脂类 132 8.5.6 矿物质 132 8.5.7 抑制物 132 8.6 培养基和血清的选择 132 8.6.1 批次预约 134 8.6.2 血清的测试 135 8.6.3 热灭活 135 8.7 其他添加物 136 8.7.1 氨基酸水解物 136 8.7.2 胚胎浸出液 136 8.7.3 适应性培养基 136 第9章 无血清培养基 137 9.1 血清的缺点 145 9.2 无血清培养基的优点 146 9.2.1 标准培养基的定义 146 9.2.2 选择性培养基 146 9.2.3 调节细胞增殖与分化 146 9.3 无血清培养基的缺点 146 9.4 血清的替代 147 9.4.1 无血清培养基的商业供应 147 9.4.2 血清替代物 147 9.4.3 无血清传代培养 148 9.4.4 激素 149 9.4.5 生长因子 149 9.4.6 血清中的营养物质 154 9.4.7 蛋白质和多聚胺 154 9.4.8 黏滞度 154 9.5 无血清培养基的选择 154 9.5.1 细胞或产物特异性 154 9.5.2 适应无血清培养基 157 9.6 无血清培养基的研发 157 9.7 无血清培养基的制备 157 9.8 无动物蛋白培养基 158 9.9 小结 158 第10章 准备与灭菌 159 10.1 准备试剂与用品 159 10.2 设备与液体的灭菌 159 10.3 设备 162 10.3.1 玻璃器皿 162 10.3.2 玻璃移液管 165 10.3.3 螺口盖 168 10.3.4 清洁剂的选择 170 10.3.5 种类繁杂的设备 170 10.3.6 可重复使用的灭菌过滤器 171 10.4 试剂与培养基 173 10.4.1 水 173 10.4.2 纯水器的维护 175 10.4.3 平衡盐溶液 175 10.4.4 培养基的配制与灭菌 177 10.4.5 干粉培养基 180 10.4.6 特制培养基 182 10.5 培养基的灭菌 183 10.5.1 可高压灭菌的培养基 183 10.5.2 除菌过滤 183 10.5.3 血清 192 10.5.4 其他试剂的准备与灭菌 195 10.6 培养基的质控、检测和储存 196 10.6.1 质量控制 196 10.6.2 无菌检测 196 10.6.3 培养物检测 197 10.6.4 储存 197 第11章 原代培养 199 11.1 原代培养入门 199 11.1.1 用于解离组织的酶 199 11.1.2 解离过程的共同特点 200 11.2 组织分离 200 11.2.1 小鼠胚胎 200 11.2.2 鸡胚 204 11.2.3 人体活检材料 206 11.3 原代培养的类型 207 11.3.1 原代外植 207 11.3.2 酶的解离作用 210 11.3.3 温胰蛋白酶消化 210 11.3.4 低温预处理的胰蛋白酶消化 213 11.3.5 鸡胚器官原基 216 11.3.6 其他酶解过程 219 11.3.7 胶原酶 220 11.3.8 机械法解离 222 11.3.9 分离活细胞 224 11.3.10 原代培养小结 225 11.3.11 原始记录 225 第12章 传代培养和细胞系 227 12.1 传代培养和扩增 227 12.1.1 交叉污染和鉴定错误 229 12.1.2 支原体污染 231 12.1.3 术语定义 231 12.1.4 细胞系的命名 232 12.1.5 培养物的年龄 233 12.2 选择细胞系 233 12.3 常规培养 234 12.3.1 细胞形态的意义 234 12.3.2 培养基的更换 235 12.3.3 标准的换液方案 236 12.4 传代 238 12.4.1 传代标准 240 12.4.2 单层生长细胞典型的传代方案 241 12.4.3 生长周期和传代比率 243 12.4.4 传代时的细胞浓度 245 12.4.5 悬浮培养细胞的扩增 245 12.4.6 悬浮生长细胞的传代 246 12.4.7 培养条件的标准化 248 12.4.8 抗生素的使用 248 12.4.9 培养记录 249 第13章 克隆培养及筛选 251 13.1 克隆培养 251 13.2 贴壁率的刺激 255 13.2.1 促进克隆生长的条件 255 13.2.2 条件培养基 256 13.2.3 饲养层细胞 257 13.3 悬浮克隆培养 259 13.4 细胞克隆的分离 264 13.4.1 单层贴壁细胞克隆的其他分离技术 267 13.4.2 悬浮细胞克隆 268 13.5 复制性培养 269 13.6 选择性抑制剂 269 13.7 遗传变异细胞的筛选 270 13.8 细胞与基质的相互作用 272 13.8.1 选择性黏附 272 13.8.2 选择性脱壁 272 13.8.3 基质性质 273 13.8.4 选择性饲养层 273 13.8.5 半固体培养基选择 273 第14章 细胞分离 275 14.1 细胞密度及等密度沉降法 275 14.2 细胞体积与沉降速率 279 14.2.1 单位重力沉降 279 14.2.2 离心淘洗分离技术 279 14.3 以抗体为基础的分离技术 280 14.3.1 免疫盘化法 281 14.3.2 免疫磁珠分选 281 14.4 荧光活化的细胞分选法 284 14.5 其他分离技术 285 14.6 初学者如何进行细胞分离实践 286 第15章 细胞鉴定 287 15.1 鉴定的需求 287 15.2 真实性验证 287 15.3 保存记录和身世 288 15.4 鉴定指标 288 15.4.1 种属鉴定 289 15.4.2 谱系或组织标记 289 15.4.3 独特标记物 291 15.4.4 转化 291 15.5 细胞形态学 291 15.5.1 显微镜使用 295 15.5.2 染色 297 15.5.3 细胞学检查所用培养器皿：单层 培养 299 15.5.4 悬浮细胞细胞学检查标本的制备 299 15.5.5 光学显微照相技术 302 15.6 共聚焦显微镜 303 15.7 染色体分析 303 15.7.1 染色体显带技术 306 15.7.2 染色体分析 307 15.8 DNA含量 308 15.8.1 DNA杂交 308 15.8.2 DNA指纹技术 308 15.8.3 DNA绘谱 309 15.9 RNA和蛋白质 314 15.10 酶活性 314 15.10.1 同工酶 314 15.10.2 利用Authentikit进行同工酶电泳 315 15.11 抗原标记 318 15.11.1 免疫染色 320 15.11.2 免疫分析 321 15.12 分化 322 第16章 分化 323 16.1 体内表型的表达 323 16.1.1 去分化 323 16.1.2 细胞谱系选择 324 16.2 分化阶段 324 16.3 增殖和分化 324 16.4 定向和细胞谱系 325 16.5 干细胞可塑性 326 16.6 分化标记物 327 16.7 诱导分化 328 16.7.1 细胞相互作用 328 16.7.2 全身性因子 330 16.7.3 细胞—基质相互作用 333 16.7.4 极性和细胞形状 334 16.7.5 氧张力 334 16.8 分化和恶性 334 16.9 应用 334 第17章 转化和永生化 336 17.1 在细胞系鉴定中的作用 337 17.2 什么是转化 337 17.3 遗传不稳定性和异质性 338 17.3.1 遗传不稳定性 338 17.3.2 染色体畸变 339 17.4 永生化 339 17.4.1 衰老的控制 340 17.4.2 病毒基因致永生化 341 17.4.3 人成纤维细胞的永生化 342 17.4.4 端粒酶诱导的永生化 345 17.4.5 淋巴细胞永生化 350 17.4.6 转基因鼠 350 17.5 生长控制异常 350 17.5.1 停泊不依赖性 350 17.5.2 接触抑制 351 17.5.3 血清依赖 353 17.5.4 癌基因 354 17.6 致瘤性 354 17.6.1 恶性化 354 17.6.2 肿瘤移植 355 17.6.3 侵袭力 355 17.6.4 血管发生 356 17.6.5 纤溶酶原活化因子 359 第18章 污染 361 18.1 污染的来源 361 18.1.1 操作者的技术 363 18.1.2 环境 364 18.1.3 层流通风橱的使用和维护 364 18.1.4 湿度恒温箱 364 18.1.5 冷藏库 365 18.1.6 无菌材料 366 18.1.7 引入的细胞系和活组织 366 18.1.8 隔离 366 18.2 微生物污染的种类 366 18.3 污染物的监控 366 18.3.1 可见的微生物污染 367 18.3.2 支原体 368 18.3.3 支原体的荧光染色 369 18.3.4 PCR法检测支原体 370 18.3.5 检测支原体的替代方法 374 18.3.6 支原体检测服务 375 18.3.7 病毒污染 375 18.4 污染培养物的处理 375 18.5 污染的去除 376 18.5.1 细菌、真菌和酵母菌 376 18.5.2 支原体的消除 377 18.5.3 清除病毒污染 378 18.5.4 顽固污染 379 18.6 交叉污染 379 18.7 结论 380 第19章 冻存 381 19.1 冻存的意义 381 19.2 冻存前注意事项 381 19.2.1 鉴定 382 19.2.2 何时冻存 382 19.3 冻存细则 382 19.3.1 细胞冻存的理论背景 382 19.3.2 细胞浓度 382 19.3.3 冻存液 383 19.3.4 冷却速度 383 19.3.5 安瓿 386 19.3.6 低温冰箱 386 19.3.7 培养细胞的冻存 389 19.3.8 冻存记录 391 19.3.9 安瓿的解冻 392 19.3.10 培养瓶冻存 394 19.4 玻璃化保存 394 19.4.1 hES细胞的冻存 394 19.4.2 hES细胞解冻 397 19.5 冻存库的设计和监控 398 19.5.1 冻存管理 399 19.5.2 细胞库存的连续更换 399 19.6 细胞库 400 19.7 细胞的运输 400 19.7.1 冻存安瓿 401 19.7.2 活细胞 401 第20章 定量 403 20.1 细胞计数 403 20.1.1 血细胞计数器 404 20.1.2 电子计数 407 20.1.3 染色的单层细胞 411 20.1.4 流式细胞仪 411 20.2 细胞质量 413 20.3 DNA含量 413 20.4 蛋白质 414 20.4.1 样品的溶解性 414 20.4.2 Bradford分析 414 20.5 合成速率 415 20.5.1 DNA合成 415 20.5.2 蛋白质合成 417 20.6 准备样品用于酶分析和免疫分析 418 20.7 细胞计数 419 20.7.1 原位标记 419 20.7.2 流式细胞术 419 20.8 重复取样 419 20.8.1 数据获得 419 20.8.2 数据分析 420 20.9 细胞增殖 420 20.9.1 实验设计 421 20.9.2 生长周期 421 20.9.3 单层细胞生长曲线的分析 425 20.9.4 培养基体积，细胞浓度和细胞密度 427 20.9.5 悬浮培养 428 20.9.6 生长周期的各个阶段 429 20.9.7 生长曲线的衍生物 430 20.10 贴壁效率 431 20.10.1 集落形成分析 433 20.10.2 自动集落计数 434 20.11 标记指数 434 20.11.1 生长分数 437 20.11.2 有丝分裂指数 438 20.11.3 分裂指数 438 20.12 细胞周期时间 438 20.13 细胞迁移 438 第21章 细胞毒性 439 21.1 活性、毒性和存活 439 21.2 体外局限性 440 21.2.1 药物代谢动力学 440 21.2.2 新陈代谢 440 21.2.3 组织和全身反应 440 21.3 分析的性质 440 21.3.1 生存力 441 21.3.2 存活 443 21.3.3 细胞增殖测定 448 21.3.4 代谢性细胞毒性测定 448 21.3.5 微滴定实验 449 21.3.6 微滴定与克隆存活的比较 453 21.3.7 药物的相互作用 454 21.4 细胞毒性实验的应用 454 21.4.1 抗癌药物筛选 454 21.4.2 肿瘤药物的前瞻性实验 454 21.4.3 药物学实验 455 21.5 基因毒性 455 21.5.1 姐妹染色单体交换的诱变实验 455 21.5.2 致癌性 458 21.6 炎症反应 459 第22章 特殊类型细胞的培养 461 22.1 特殊细胞培养技术 463 22.2 上皮细胞 463 22.2.1 表皮 464 22.2.2 角膜 469 22.2.3 乳腺 471 22.2.4 子宫颈 473 22.2.5 胃肠道 476 22.2.6 肝 478 22.2.7 原代肝细胞培养 478 22.2.8 人肝癌细胞系HepaRG 481 22.2.9 胰 483 22.2.10 肾 485 22.2.11 气管和支气管上皮 487 22.2.12 口腔上皮 489 22.2.13 前列腺 490 22.3 间充质细胞 492 22.3.1 结缔组织 493 22.3.2 脂肪组织 493 22.3.3 肌 495 22.3.4 软骨 501 22.3.5 骨 504 22.3.6 内皮细胞 506 22.4 神经外胚层细胞 512 22.4.1 神经细胞 512 22.4.2 神经胶质细胞 513 22.4.3 内分泌细胞 519 22.4.4 黑素细胞 520 22.5 造血细胞 523 22.6 生殖腺 524 22.6.1 卵巢 524 22.6.2 睾丸 524 第23章 干细胞、生殖细胞和羊水细胞 525 23.1 干细胞 525 23.1.1 胚胎干细胞 525 23.1.2 小鼠胚胎干细胞的诱导 525 23.1.3 小鼠胚胎干细胞的传代培养和扩增 530 23.1.4 人胚胎干细胞的原代培养 532 23.1.5 hES细胞的传代 534 23.1.6 鱼胚胎来源的多能干细胞 535 23.2 生殖细胞 539 23.3 胚外细胞 540 23.3.1 羊水细胞的培养 540 23.3.2 从新生儿或青年来源的细胞 544 23.3.3 成人来源的多能干细胞 544 23.3.4 人骨髓来源间充质干细胞 545 23.3.5 诱导多潜能干细胞 548 23.3.6 小鼠骨髓长期培养 552 23.3.7 人原始造血细胞长期培养 554 23.3.8 造血细胞集落形成分析 559 第24章 肿瘤细胞培养 562 24.1 肿瘤细胞培养中的问题 562 24.2 取材 563 24.2.1 代表性细胞的选择 563 24.2.2 冷冻组织保存 564 24.3 分离 564 24.4 原代培养 565 24.5 肿瘤细胞的选择培养 566 24.5.1 选择培养基 566 24.5.2 汇合饲养层 566 24.5.3 悬浮克隆 569 24.5.4 异种移植 569 24.6 细胞系的建立 570 24.6.1 原代肿瘤培养物的传代 570 24.6.2 连续细胞系 570 24.7 肿瘤细胞培养物的特征 571 24.7.1 肿瘤细胞的异质性 571 24.7.2 组织型培养 572 24.8 特殊类型肿瘤 572 24.8.1 乳腺 572 24.8.2 肺 574 24.8.3 胃 575 24.8.4 结肠 575 24.8.5 胰腺 578 24.8.6 卵巢 578 24.8.7 前列腺 578 24.8.8 膀胱 579 24.8.9 皮肤 579 24.8.10 子宫颈 580 24.8.11 胶质细胞瘤 580 24.8.12 神经母细胞瘤 581 24.8.13 精原细胞瘤 581 24.8.14 淋巴瘤和白血病 581 第25章 三维培养 583 25.1 细胞的相互作用和表型表达 583 25.1.1 细胞密度的作用 583 25.1.2 相互作用 584 25.1.3 模型的选择 584 25.2 器官培养 586 25.2.1 气体和营养物质的交换 586 25.2.2 结构的完整性 586 25.2.3 生长与分化 587 25.2.4 器官培养的限制 587 25.2.5 器官培养的类型 587 25.3 组织型培养 589 25.3.1 凝胶和海绵技术 589 25.3.2 中空纤维 590 25.3.3 球体 590 25.3.4 转动室系统 593 25.3.5 藻酸盐活细胞固定术 594 25.3.6 滤膜培养皿 594 25.3.7 神经聚集物的培养 597 25.4 器官型培养 599 25.4.1 组织等同物 599 25.4.2 组织工程 599 25.5 三维构建物中细胞的成像 601 第26章 规模与自动化 602 26.1 悬浮规模培养 602 26.1.1 连续培养 605 26.1.2 规模和复杂性 606 26.1.3 搅匀和换气 608 26.2 单层规模培养 610 26.2.1 多表面扩增器 610 26.2.2 旋转培养 613 26.2.3 微载体 615 26.2.4 巨型微载体 617 26.2.5 灌流式单层培养 619 26.3 程序控制 620 26.4 自动化 621 26.4.1 机器人细胞培养 621 26.4.2 高产量检测 622 第27章 特殊技术 624 27.1 淋巴细胞的制备 624 27.1.1 隔离的密度 624 27.1.2 淋巴母细胞的转化 625 27.2 放射自显影术 626 27.3 间隔性记录 632 27.4 细胞同步化 634 27.4.1 细胞分离 634 27.4.2 阻断 635 27.5 冷血动物细胞的培养 635 27.5.1 鱼细胞 636 27.5.2 昆虫细胞 636 27.6 体细胞融合 637 27.6.1 细胞杂交 637 27.6.2 移核实验 640 27.7 单克隆抗体的制备 640 第28章 培训纲要 646 28.1 目的 646 28.2 实验制备及操作技巧 647 28.3 基本的细胞培养技术 660 28.4 高阶练习 682 28.5 特殊练习 697 第29章 问题与对策 698 29.1 细胞异常形态 698 29.2 细胞生长缓慢 699 29.2.1 仅限于自己细胞出了问题 699 29.2.2 其他人也遇到同样的问题 699 29.3 培养基 700 29.3.1 试剂配方、准备和存储 700 29.3.2 不稳定试剂 701 29.3.3 配制培养基各种成分的纯度 702 29.4 基质和容器 703 29.5 微生物污染 703 29.5.1 仅限于单个实验者的问题 704 29.5.2 普遍问题 705 29.5.3 室内供气和层流净化工作台 706 29.5.4 特定污染 706 29.6 化学污染 707 29.6.1 玻璃器皿 707 29.6.2 移液管 707 29.6.3 水的纯化 707 29.6.4 低温冻存 707 29.6.5 粉末或气溶胶 708 29.7 原代培养 708 29.7.1 原代培养的存活率低 708 29.7.2 选择细胞错误 709 29.7.3 污染 709 29.8 分化 710 29.9 饲养层 710 29.9.1 常规单层培养 710 29.9.2 克隆培养 710 29.10 传代 711 29.10.1 收获率低或生长缓慢 711 29.10.2 生长不均匀 711 29.11 克隆 712 29.11.1 培养皿形成的克隆数过低 712 29.11.2 培养皿形成的克隆数太多 713 29.11.3 非随机分布 713 29.12 交叉污染和错误标记 713 29.13 冻存 714 29.13.1 复苏时存活率低 714 29.13.2 冻存后细胞形态发生变化 714 29.13.3 冻存细胞丢失 715 29.14 细胞计数 715 29.14.1 血细胞计数板 715 29.14.2 使用电阻抗法电子计数仪 715 第30章 结语 717 附录Ⅰ 计算配制及试剂制备 719 附录Ⅱ 设备及材料来源 733 附录Ⅲ 供应商和其他资源 763 附录Ⅳ 术语 779 附录Ⅴ交叉污染或鉴定有误的细胞系 789 附录Ⅵ 一般教材与相关期刊 809 参考文献 811 索引 883