• 1.摘要
  • 2.基本信息
  • 3.简介
  • 4.介绍

鸟枪法克隆

鸟枪法克隆是用BamH1和CIP处理pCB20质粒,Sau3Al部分降解枯草杆菌抗阿霉素突变株染色体DNA,T4连接酶连接载体和DNA片断,构成表达文库。用这个文库分别转化枯草杆菌BD224菌株感受态细胞和原生质体。

基本信息

  • 中文名

    鸟枪法克隆

  • 细则

    BamH1和CIP处理质粒

  • 最终目的

    构成表达文库

  • 转化结果

    感受态细胞和原生质体

简介

用BamH1和CIP处理pCB20质粒,Sau3Al部分降解枯草杆菌抗阿霉素突变株染色体DNA,T4连接酶连接载体和DNA片断,构成表达文库。用这个文库分别转化枯草杆菌BD224菌株感受态细胞和原生质体。

介绍

对某基因组文库全部克隆片段进行末端序列测定中未测到的碱基数,即缺口(gap),与已测定的总碱基数相关。随着已测定碱基数的增加,缺口的总碱基数目会按照泊松公式的一个推论(P=e-m)迅速减小。其中P为基因组中某个碱基未被测定的概率,m为所测定的碱基数与基因组大小相比的倍数。m越大P值越小。当m值达到5(即随机测定的碱基数达到基因组5倍时),基因组中未测定的碱基数为基因组总碱基数的0.67%(e-5=0.0067)。对流感嗜血杆菌这样大的基因组(1.83Mb),可能留有128个平均长度为100bp的缺口。