细胞凋亡检测方法

细胞凋亡(apoptosis)即程序性细胞死亡(programmedcel death，PCD)。Apoptosis一词源于希腊文，是指秋天树叶凋落，它是一种不同于坏死的由基因调控的细胞主动性死亡过程，是细胞在一定的生理或病理状态下，遵循自身的程序，自己结束自己生命的过程，最后细胞脱落离体或裂解为若干凋亡小体，而被其他细胞吞噬[1,7]。它在胚胎发育、造血、免疫系统的成熟以及维持正常组织和器官的细胞数目恒定与生长平衡、乃至机体衰老方面都起着重要的作用。因此，有关凋亡的研究在临床和基础等各个领域已经广泛开展起来，凋亡细胞的检测方法显得非常重要。   1光学显微镜检查

细胞涂片或组织切片在PAS或HE染色后，即可在油镜下观察，若同时进行细胞免疫组化研究，则可判别AP细胞种类。判断标准：①散在单个细胞。②细胞体积缩小。③轮廓清楚，常有一环形的空白区，胞浆嗜酸性。④核浓缩，边聚碎裂呈分散的嗜碱性块。⑤胞内凋亡小体。⑥无炎症反应。

2电子显微镜检查 

电镜是观察细胞形态最好的方法。细胞核和细胞器亚微结构清晰易辨，尤其是电子显微镜与数字图形处理系统结合可观察到超微结构更细微的变化。虽然光学显微镜下可以看见胞膜起泡现象和凋亡小体，但凋亡细胞的形态学变化大多发生在超微结构，因此用光镜观察难以令人满意，而透射电镜可清楚地观察到细胞结构在凋亡不同时期的变化。电镜形态学观察是迄今为止判断凋亡最经典、最可靠的方法，被认为是确定细胞凋亡的金标准。Ap过程的重要变化是细胞染色体的碎片状分解，细胞器变化和生物膜呈空泡状。电镜标本的制备同常规处理，电镜下可见Ap细胞体积缩小，小体积细胞比例增高。细胞表面纤毛丧失，细胞核沿核膜内侧边缘开始固缩，电子密度升高。在初期细胞器仍保持完整。扫描电镜下Ab小体的表面生物膜形成大量气泡和空泡，呈沸腾状和凹陷状变化；透射电镜下则呈圆形结构，内含多个或整个细胞器，也可含一部分细胞核。