尿环磷腺苷
环腺苷酸作为肽类激素的第二信使,在激活蛋白激酶,使核糖体中蛋白质磷酸化,加速“翻译”过程和促进特异性蛋白质的合成等方面起着非常重要的作用。临床上测定环腺苷酸对多种疾病诊断和疗效判断有一定意义。微孔薄膜分离B·F成本低廉,闪烁液可重复使用5次以上。该法为非均相测量,测量放射性的效率约20%~25%。
概述
环腺苷酸作为肽类激素的第二信使,在激活蛋白激酶,使核糖体中蛋白质磷酸化,加速“翻译”过程和促进特异性蛋白质的合成等方面起着非常重要的作用。临床上测定环腺苷酸对多种疾病诊断和疗效判断有一定意义。
别名
尿环磷酸腺苷
尿环磷腺苷的医学检查
检查名称
尿环磷腺苷
分类
体液和排泄物检查 > 尿液检查
尿环磷腺苷的测定原理
cAMP是一种小分子半抗原,其特异性抗体是以人工合成的2'-0-ScAMP-BSA结合物免疫动物所获得。抗体对2'-0-位有取代基的cAMP的亲和力较无取代基的cAMP约大100倍。为提高测定方法的灵敏度高,测定时应将[3H]标记cAMP,样品和标准同时进行琥珀酰化反应,然后和抗体反应。从标准曲线查出样品中的浓度。
试剂
(1)抗血清:
①ScAMP的合成:取cAMP20mg,琥珀酸酐100mg至反应瓶中,加去离子水2ml,三乙胺0.2ml,磁力搅拌反应30min。置真空干燥内减压除去三乙胺。加水20ml,放24h,用1mol/L NH4OH调至pH7.0。即刻用强碱型聚苯乙烯阴离子交换柱层析。0.3mol/L甲酸淋洗,收集258nm流出液。合并,冷冻干燥,产物为ScAMP。
②取ScAMP:经偶联剂作用和BSA结合,作为免疫原,注射山羊或家兔,制备抗血清。
(2)[3H]-ScAMP:取[3H]-cAMP(中国原子能研究院产品)92.5kBq(2.5μCi)至瓶中,加琥珀酸酐5mg,去离子水0.1ml,三乙胺10μl,即刻混合,用力摇45s,加50mmol/L pH6.2醋酸缓冲液至10ml,临用前配制。
(3)50mmol/L pH6.2醋酸盐缓冲液:取AR级无水醋酸钠4.1g于800ml蒸馏水中,加茶硷1.44g,溶解后用2mol/L醋酸调至pH6.2,加蒸馏水至1000ml,4℃保存。
(4)标准cAMP液(320nmol/L):取纯化cAMP1.11mg,加50mmol/L pH6.2醋酸盐缓冲液10ml,微温至溶,放-20℃可长期保存。
(5)标准cAMP(320pmol/瓶):取标准cAMP液0.2ml至10ml容量瓶中,加去离子水至10ml刻度。取5ml带塞瓶,每瓶加50μl,放37℃干燥,4℃水箱可保存3年内稳定。